365助孕网_梦圆助孕正规吗_两步移植法移植两个胚胎成双胞胎的多吗？

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两步移植法移植两个胚胎成双胞胎的概率还是比较低的，只有在女性子宫环境好，并且胚胎鲜胚质量好的情况下，才会成功。如果移植一个胚胎，患者的身体情况不好，会导致移植成功率不高，移植两个胚胎是为了保证至少有一个胚胎存活，所以移植两个胚胎成双胞胎的情况是不多的，并且妊娠双胎的风险也比较高。

试管婴儿移植胚胎成双胞胎的案例还是有的，只是妊娠双胎的风险很高，妊娠期间也会有很多并发症，如果胎儿情况不好或者是孕妇身体不理想，医生也会建议减胎，下面可以了解一下移植两个胚胎成双胞胎的概率：

1.一般情况下，生殖中心会做单胚胎移植，只移植一个胚胎，则发生双胞胎的几率就较低；

2.如果如果移殖2-3个胚胎，发生双胞胎甚至三胞胎的几率较高，部分双胞胎的几率只有3%-8%，有的会到30%-40%；

3.两步移植法移植两个胚胎会比单胎的几率高，但移植两个胚胎到女性体内，发生多胎妊娠的发生几率要明显高于自然妊娠，根据数据显示试管婴儿双胎妊娠的几率大概30%左右。

ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。

样本制备指南

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血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品

2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

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，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。

其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。

4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；

悬浮细胞

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

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个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。

其余方法：

对于

贴壁细胞

：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。

对于

悬浮细胞

：离心收集细胞，以2×10

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细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成（5-10）×10

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细胞/管，然后再裂解。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

5.细胞培养上清或其他生物体液

收集液体后于2-8℃，1000×g离心20min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注：因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响，不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。

实验细节与注意事项

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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性。

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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。

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检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：

稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；

稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；

稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；

每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。

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若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。

想要优生优育，叶酸你吃对了吗？试管婴儿准妈妈哪些阶段需要补充叶酸？

叶酸对备孕女性来说并不陌生，只要是有育龄计划的家庭，医生都会建议孕前3个月必须补充叶酸，为怀孕做准备。但叶酸是什么，叶酸有什么作用，或许很多准妈妈并不知道。本期话题分享：叶酸在备孕过程中的作用是什么？接受试管婴儿的准妈妈应该如何科学补充叶酸？

想要优生优育，叶酸你吃对了吗？

叶酸是一种满足胎儿发育不可或缺的营养物质，是维生素B的一种，叶酸的补充能够及早预防胎儿的神经管缺陷现象，以及脊柱裂或者是无脑儿等非常危险的先天性缺陷疾病。另外，叶酸能起到预防孕妇贫血的作用，也能减少孕晚期患先兆子痫的发生。充足的叶酸补给，是促进胎盘和胎宝宝快速发育成长的必须物质。

总的来说，叶酸对于准妈妈和胎宝宝的起着非常重要的作用，也是优生优育，降低缺陷儿出生几率的有效预防措施。孕前3个月坚持服用推荐剂量的叶酸，能大大降低后代出生缺陷。

想要优生优育，叶酸你吃对了吗？

虽然叶酸对于母婴健康有着非常重要的作用，但身体对于叶酸的吸收作用并非一日之功可实现的。叶酸维生素的吸收需要一个过程，一般孕前3个月开始补充，慢慢改善和调理身体内的叶酸环境，为备孕怀胎储备更加的身体条件。试管婴儿准妈妈也同样不可忽视，虽然受精过程和胚胎培育均在体外完成，但对叶酸的需求同样不会少于自然受孕，必须保证体内的叶酸水平维持在一定的含量，为胚胎宝宝做好叶酸的贮存准备，能够在一个叶酸量充足的环境里成长。

试管婴儿准妈妈应该如何补充叶酸？什么时候补？

在生育力检查和评估的同时，建议到医院咨询医生关于叶酸的补充时间和具体的注意事项，叶酸的补充时间和作用主要在这几个阶段：

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孕前1-3个月（每天400微克）：

美国疾病控制中心研究发现，女性在怀孕前1个月-3个月内，每天坚持服用400微克的叶酸，可以使宝宝患神经管畸形的概率减少50%～70%。

孕早期前3个月（每天400微克）：

怀孕头三个月，是胎盘形成与宝宝器官分化的重要时期，胎儿在母体早期发育时间内，需要进行神经管的发育与闭合，如果叶酸量不够，就会造成神经管闭合不正常，进而造成婴儿先天畸形，例如脑膨出，无脑儿，智力低下，脊柱裂等等。北京大学的一项研究表明，摄入足量的叶酸可以有效阻止降宝宝出现表体畸形的症状，降低新生儿死亡率。

孕期3个月-分娩前：

专业医生表示，在孕中期、孕后期，婴儿的DNA合成、胎盘已经稳定，而发育也基本已经定型，这时候胎儿对叶酸的需求量减少，相对却对维生素等成分的需求量增加。在条件许可的情况下，可以坚持在整个孕期服用适量的叶酸，补充维生素的同时，也能帮助预防孕妇水肿和贫血等问题。每天的早晨或者上午，吃完早饭后服用叶酸，吸收效果更佳。

想要优生优育，叶酸你吃对了吗？

想要优生优育，叶酸你吃对了吗？试管婴儿准妈妈哪些阶段需要补充叶酸？总的来说，试管婴儿孕前孕后三个月是叶酸补充的关键时间，之外的孕期叶酸补充，需严格按照医生医嘱，不可擅自过量服用，避免不良反应发生。坚持正确科学地服用叶酸，孕育健康聪明的后代宝宝，准妈妈一定不能偷懒哦。

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